[摘要]目的 建立反相高效液相法测定心舒片中葛根素含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶柱,流动相为乙腈∶水(10∶90);检测波长为250 nm。结果 葛根素在0.079~1.185 μg范围内呈良好的线性关系;平均回收率为96.21%,RSD=1.10%。结论 该方法不仅操作简单、准确,且重复性好,可用于心舒片的质量控制。 [Key words] RP-HPLC;puerarin;Xinshu pian;content determination 心舒片是本院的院内制剂,由葛根、毛冬青、红花、益母草等9味中药组成,具有活血化瘀的功效,用于心脉瘀阻所致的胸痹心痛、冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不全,临床应用多年,疗效确切。为了更好地保证临床疗效,本文建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定心舒片中葛根素的含量,控制心舒片的质量。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪,SPD-10AV紫外检测器;CT-100恒温箱。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211D AG电子天平(德国Sartorius)。 1.2 试剂 乙腈为色谱醇,水为重蒸水。葛根素(中国药品生物制品检定所,批号:110752-200209);心舒片(本院制剂室生产)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 (1)色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱Kromasil C18(250×4.6 mm,5 μm)(天津市琛航科技仪器有限公司)。(2)流动相:乙腈∶水(10∶90)。(3)检测波长:250 nm。(4)流速:1.0 ml/min。(5)柱温:40 ℃。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥12 h的葛根素对照品,加50%的乙醇制成每1 ml含0.05 mg的溶液,即得。 2.3 供试品溶液的制备 取心舒片10片,除去糖衣,精密称定,研细,取细粉约0.1 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入50%的乙醇25 ml,称定重量,超声处理(功率250 W,频率50kHz)30 min,放冷,再称定重量,以50%的乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。 2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除葛根的其他药材适量,依照心舒片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。 2.5 线性关系的考察 分别精密吸取葛根素对照品溶液(浓度为0.079 mg/ml)1 μl、2 μl、6 μl、10 μl、15 μl,注入液相色谱仪,测定,以葛根素的进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。回归方程为Y=1E+07X+196030(r=0.9999)。结果表明葛根素在0.079~1.185 μg范围内具有良好的线性关系。 2.6 精密度试验 2.7 重复性试验 取同一批心舒片(批号:060321),除去糖衣,研细,取细粉5份,每份约0.1 g,精密称定,按2.3项下的方法制备样品,进行含量测定。结果分别为5.503 mg/片、5.511 mg/片、5.547 mg/片、5.378 mg/片、5.322 mg/片,平均为5.452 mg/片,RSD为1.78%。表明本方法具有较好的重复性。 2.8 稳定性试验 取重复性试验项下试验号5的供试品溶液,每2 h进样1次,每次10 μl,连续进样6次,结果表明在10 h内峰面积积分值基本稳定,RSD为0.48%。 2.9 回收率试验 贮备溶液:精密称取葛根素对照品7.9 mg,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成每1 ml中含葛根素0.79 mg的溶液。 取已知含量(5.452 mg/片)的心舒片小试样品(批号:060321),除去糖衣,研细,取细粉约0.05 g(6份),精密称定,1号、2号分别精密加入贮备溶液0.61 ml,3号、4号分别精密加入贮备溶液1.0 ml,5号、6号分别精密加入贮备溶液1.4 ml,水浴蒸干,按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量,计算回收率,结果平均回收率为96.21%,RSD为1.10%。见表1。表1 回收率试验结果(略) 2.10 样品测定 按拟定的含量测定方法测定三批心舒片中葛根素的含量,结果见表2。表2 含量测定结果 (略) 3 讨论 通过对提取溶媒、提取时间进行了考察(见图1~3),结果以加入50%的乙醇、超声处理30 min为佳。干扰试验结果表明,葛根的阴性对照样品无干扰。该方法不仅操作简单、准确,且重复性好,可用于心舒片的质量控制。根据测定的结果,并考虑到药材的产地、采收、加工等因素,暂定每片心舒片含葛根以葛根素(C21H20O9)计不得少于3.0 mg。 |