作者：卫景沛，李剑，史哲，王拥军 【摘要】 目的观察灯盏细辛对兔动脉粥样硬化病变进展的抑制作用。方法将35只雄性新西兰白兔随机分为正常对照组(n=9)及高脂饮食组(n=26)。高脂饲料组以1%胆固醇饲料，喂养6周，6周后随机抽取2只，观察主动脉组织病理形态，以明确动脉粥样斑块形成。6周时高脂组依据兔子体质量随机分为高脂组(高脂饮食)(n=12)、灯盏细辛组(5 ml/kg/d 腹腔注射)(n=12)，药物与高脂饮食同步干预。实验前、6周、14周取血清，测定血脂浓度(TC，TG，LDL，HDL)。14周时取胸主动脉行苏木精伊红染色(HE),测定内膜、中膜厚度;测粥样斑块面积;免疫组化测定IL-6的阳性细胞百分比，染色结果行定量分析。结果高脂饮食各组血脂显著增高，主动脉见典型脂质条纹，局部斑块形成，病变处IL-6显著表达。与单纯高脂组相比，中药灯盏细辛治疗组主动脉内膜增厚显著减轻，粥样斑块面积缩小(P<0. 05);灯盏细辛治疗组能减低斑块中IL-6百分数，两者之间差异有显著性;灯盏细辛不能降低血清中胆固醇水平。结论中药灯盏细辛有抑制内膜增生和动脉粥样硬化病变进展的作用，中药灯盏细辛不能降低血清中胆固醇水平。 【关键词】 动脉粥样硬化; 炎症; 白细胞介素-6; 灯盏细辛 脑血管疾病(cerebrovascular discases,CVD)具有发病率、死亡率、致残率和复发率高的特点，是导致全球人口死亡的三大疾病之一。我国每年新发脑卒中患者约200万人，每年死于脑卒中的患者约150万;存活的患者人数600万～700万[1]。在所有脑血管疾病中，缺血性脑血管疾病(ischemiccerebrovascular diseases，ICVD)占了大约85%[2]。动脉粥样硬化被认为是缺血性脑血管病独立重要的危险因素，因此积极干预动脉粥样硬化形成是预防缺血性卒中发生的重要措施。本实验研究灯盏细辛注射液对兔动脉粥样硬化病变进展的抑制作用。 1 材料与方法 1.1 药品和试剂总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C) 、低密度脂蛋白(LDL-C)(中生北控生物科技股份有限公司); IL-6单克隆鼠抗人抗体(Sant Cruz公司)、PV-9000二步法免疫组化检测试剂盒(北京中杉试剂公司)。 1.2 动物分组和模型建立健康新西兰纯种雄性大白兔35只(质量在2.0～3.0 kg)，单独喂养并检疫3 d备用，随机分为两组：正常对照组为A组：9只白兔，予正常饲料、普通饮水饲养14周。余26只给予1%胆固醇饲料，普通饮水饲养6周，随机处死2只兔，近主动脉弓处取约2 cm的血管,肉眼观察和病理形态学检查，了解主动脉处斑块形成情况。然后依据24只白兔体重随机分组，依次为B、C组。B组为单纯高脂组12只，每日上午给予高脂饮食，普通饮水。C组为灯盏细辛组12只白兔，上午给予高脂饮食喂养，同期给予灯盏细辛5 ml/(kg·d)(腹腔注射)。 1.3 血脂检测实验前、6周、14周(实验结束时)耳缘静脉取血，测量兔子血脂情况。 1.4 病理形态学观察饲养14周处死动物后细分离主动脉，观察动脉大体形态，包括内膜是否光滑、有无增厚及斑块形成等。激光摄影，利用图像分析技术和分析软件，计算斑块面积及整个内膜面积。取主动脉弓起始部约3. 0 cm动脉段，选取较长的一段置液氮中保存，用于进行免疫组化染色。较短的一段(约1. 0 cm)置入4%多聚甲醛中固定48 h，常规酒精脱水，石蜡包埋制成蜡块。动脉的苏木精伊红(HE)染色，从每张HE染色片上随机选取5个病变视野，图像分析仪测定内膜和中膜厚度，并计算内膜/中膜厚度比，取其平均值。 1.5 免疫组化胸主动脉的常规二步法IL-6免疫组化染色。 1.6 结果观察阳性为棕黄色或棕褐色，并呈颗粒壮。每只家兔观察3张石蜡切片，每张切片随机选取5个视野，所有切片采用IM50显微摄像系统、NiKON数码相机、Simple PCI细胞图象分析系统、医学图象分析软件进行图象分析，计算阳性染色百分比，取其均值。 1.7 统计处理所有指标数据都以±s表示，数据处理采用统计软件SPSS 11. 5分析。各处理组间比较用one-way ANOVA方差分析，以P<0. 05为统计学上差异有显著性意义，P<0. 01表示有非常显著性差异。 2 结果 2.1 血脂检测结果实验结束时动物死亡及其他原因剔除后，每组留动物9只。各组之间体质量在实验开始时、6周及14周时无显著性差异(P>0.05)。实验开始时，各组之间血脂水平无差异。6周时，B、C组血脂水平明显高于A组，而B、C之间无差异。14周时TC、TC、HDL-C、LDL-C水平，B、C组血脂水平各组存在差异，但无统计学意义(P>0.05)。见表1。 2.2 病理形态学观察14周时，正常对照组病理切片镜下见主动脉内膜较薄，结构完整，内皮下无脂质沉积，未见脂质斑点或粥样斑块形成(见表2及图1)。高脂组(B组)可见明显的脂质条纹病变，部分出现纤维脂肪性病变和局部粥样硬化病灶，大量泡沫细胞聚集于血管内膜，导致血管内膜显著性增厚或向管腔内隆起，许多血管内膜断裂，局部血栓形成，部分可见泡沫细胞崩解(图2)。灯盏细辛组(C组)亦可见血管内膜大量泡沫细胞聚集，内膜增厚，部分血管内膜断裂。但较高脂饮食组减轻(图3)。统计学显示主动脉厚度、斑块面积、IL-6表达阳性率各组之间P=0.000。B与C，用Bonferroni检验P=0.01。表明组组之间差异有统计学意义。正常饮食组IL-6表达极少(图4);高脂饮食组IL-6表达均显著增加(P<0.01与正常组相比)(图5)，与高脂组相比，灯盏细辛组IL-6表达均显著减低(图6)。表1 各组之间0、6、14周时体重及血脂水平表2 14周时各组动物动脉内膜厚度内/中膜厚度比、斑块面积IL-6阳性比 3 讨论 动脉粥样硬化(AS)是大多数心肌梗塞和脑血管病变的病理基础，是威胁人类健康和生存的最重要疾病之一。其发病机制有多种学说:脂肪浸润学说、血小板聚集和血栓形成学说、氧化学说、巨噬细胞受体缺失学说、损伤反应学说等。高胆固醇血症、高血压病、糖尿病、吸烟等动脉硬化危险因子都能损伤血管内皮,血管内皮细胞受损后LDL渗入并积聚于内皮下，被血管壁细胞的脂氧合酶及反应性氧基团氧化为OX-LDL， OX-LDL中的某些脂类作为信号分子,与细胞的受体结合后激活基因表达,促使内皮细胞表达许多黏附分子,进而血流中的单核细胞、T淋巴细胞黏附于受损内皮表面,单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)使单核细胞迁移入内皮下,摄取OX-LDL 转化为激活的巨噬细胞,最终成为充满脂质的泡沫细胞[3]。动脉粥样硬化的发生和发展是一个复杂的过程，动脉粥样硬化是一种涉及循环血小板、白细胞与血管壁上各种细胞相互作用的炎症性疾病，激活的血小板及血小板与白细胞聚集能促进动脉粥样硬化病变的形成和发展[4]。灯盏细辛又名灯盏花、东菊,盛产于云南，是菊科植物短葶飞蓬[ Erigeron breviscap us (V ant) HandM azz. ]的干燥全草，《中国药典》1977年版曾予以收载,其性寒、微苦、甘辛，具有散寒解表、祛风除湿、活血化淤、通经活络、止痛功效。灯盏细辛注射液为纯中药制剂，有活血化瘀之功效，具有扩张血管、抑制血栓形成、清除自由基、抑制钙超载和抑制细胞外兴奋性氨基酸的堆积而减轻脑缺血损伤，对脑缺血损伤有确切的疗效[5]。研究证明灯盏细辛具有抑制血小板CD62p的表达、降低前炎性因子TNF-α、IL-6表达的作用，从而可能具有降低了sICAM-1 的表达的作用[6]。本研究结果显示，中药灯盏细辛药物不仅具活血化瘀，改善血小板功能，而且具有明显抗炎作用;从而阻断动脉粥样硬化的启动，抑制动脉粥样硬化发展。 【参考文献】 [2] 张 茁，张微微.缺血性卒中二级预防循证医学证据[M].北京：人民卫生出版社，2007：1. [3] Anne Hackman, YasunoriAbe. Levels of soluble adhesion in patientswith dyslip idemia[J]. Circulation，1996，93:1334. [4] Huo Y，Sehober A，Forlow SB，et a1.Circulating activatedplatelets exacerbate atheroselemsis in mice deficient inapolipoprotein E[J].Nature Medicine，2003，9(1)：61. [5] 虞炳庆，芮晓东，黄明章.灯盏细辛注射液治疗脑梗死的临床疗效研究[J]. 中西医结合心脑血管病杂志，2003，1(3)：175. [6] 王金良，谭 峰，顾 卫.灯盏细辛注射液对急性脑梗死患者血清黏附分子sICAM-1CD11b/CD18的影响[J]. 国际医药卫生导报，2006，19(12)：4.
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