摘要：目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法，以甲醇-水（32∶68）为流动相，检测波长为250 nm测葛根素含量；紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高，峰形改善；葛根素0.204～2.04 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），回收率为98.7%(n=5)，精密度RSD=0.86%。总黄酮浓度在4.08～16.32 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好（r=0.999 8)。结论该法灵敏、准确、简便易行，重复性好，可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。
关键词：葛根 葛根素 含量 分析
0 引言
葛根为豆科植物柴葛和甘葛藤的干燥根，前者习称柴葛，甘葛藤习称“粉葛”，始载于《神农本草经》，味甘、辛，性平，具有增加脑及冠状动脉血流量、降低血管阻力、收缩平滑肌、降血糖及解热等多种功效。民间用于治疗伤寒、温热头痛、烦热消渴等症，也是中医常用的祛风解毒药。现代研究表明，葛根含葛根异黄酮，主要为葛根素、大豆苷、大豆苷元3种活性成分，其中葛根素是本属的特征成分，也是主要成分，为了对葛根进行有效的质量控制，本实验以葛根素为指标，以柴葛、粉葛药材为对象，建立了高效液相色谱法测定其葛根素的含量方法，并采用紫外分光光度法对其中的总黄酮进行了含量测定，为柴葛、粉葛的药材鉴定提供参考方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器美国 Waters 公司600-2487高效液相色谱仪，Millenium数据处理系统;Waters2487紫外检测器；岛津UV-2401PC型紫外分光光度计；岛津AY120型万分之一电子分析天平；SB3200型超声清洗器。
1.2 材料葛根素对照品：中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏超纯水；其它试剂均为分析纯。柴葛产于安徽岳西，粉葛产于广西。
2 方法与结果
2.1 HPLC法测定葛根中葛根素的含量
2.1.1 色谱条件色谱柱：Zorbax XDB-C18（4.6mm×250mm， 5μm)；流动相∶甲醇-水（32∶68）；流速1ml/min；检测波长250 nm；柱温22℃；进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下，样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3 min左右。
2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg，甲醇定容于25ml量瓶。分别移取0.5，1.0，2.0，2.5ml于5ml量瓶，水定容，与原液共同作为HPLC用对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备 热回流提取法：精密称取柴葛、粉葛粉末（过50目筛）各0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml，称重。回流提取30min，放冷，称重并以30%乙醇补足减失重量，摇匀过滤，取续滤液为供试品，待测。
索氏提取法：称取柴葛、粉葛粉末各0.5g， 精密称定，以甲醇为提取剂提取4h，过滤，浓缩提取液并用甲醇定容于10ml量瓶。超声处理30min，取上清液以水定容于10ml量瓶，待测。
2.1.4 线性关系考察取对照品溶液，按照色谱条件进样10μl，葛根素进样量X(μg)为横坐标，以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为：Y=3.5076×106X+3.2745×104，r=0.9999。结果表明，葛根素进样量在0.204～2.04μg范围内与峰面积线性关系良好，可用外标两点法计算含量。
2.1.5 精密度考察在色谱条件下，吸取同一对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积，RSD=0.8%，表明进样与峰面积积分的精密度良好。
2.1.6 重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份，按外标法计算含量，RSD=2.8%，表明分析方法重复性良好。
2.1.7 稳定性考察精密吸取对照品溶液10μl，分别在0，1，2，4，8，12，24，48h时进样，在色谱条件下测定峰面积，其RSD值为1.4%。表明葛根素在室内正常条件下48h内稳定，因此整个实验过程可以在常温不避光的条件下操作。
2.1.8 回收率考察精密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份，20mg/份，精密称定后，每份加入浓度为0.204mg/ml的对照品溶液2.5～3.3 ml，按“供试品溶液制备”项下操作，精密吸取10 μl，进样，计算回收率。
2.1.9 样品测定按“供试品溶液制备”项下操作，制备各样品溶液，精密吸取10μl，进样，在所选色谱条件下测定，外标两点法计算含量。
2.2 紫外分光光度法测定葛根中总黄酮含量
2.2.1 线性关系考察精密称取葛根素对照品5.1mg，甲醇定容于25ml量瓶。移取0.2，0.4，0.5，0.6，0.8ml置于10ml量瓶，水定容，为紫外测总黄酮用对照品溶液。
以溶液浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，得线性方程：Y= 0.078X+0.0152，r=0.9998。表明总黄酮浓度在4.08～16.32μg/ml范围时与吸收度线性关系良好。
2.2.2 供试品制备 方法1：分别称取柴葛、粉葛4.5g，置于圆底烧瓶，乙醇回流提取3次，40ml/次，时 |
